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              產(chǎn)品目錄
              雞臟器組織白細(xì)胞分離液說明書
              更新時(shí)間:2016-07-28 點(diǎn)擊量:1484

               

               

              雞臟器組織白細(xì)胞分離液說明書

               

              (細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué))

               

              【產(chǎn)品規(guī)格】

               

              200ml/Kit

               

              貨號(hào):WBC1090CP

               

              【產(chǎn)品組成】

               

              為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:

               

               

               

               

              名稱

              產(chǎn)品編號(hào)

               

              規(guī)格

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              A

              XXXX 動(dòng)物組織白細(xì)胞分離液

               

               

               

              200ml

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              B

              樣本稀釋液(贈(zèng)品)

              2010C1119

               

              200ml

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              C

              清洗液(贈(zèng)品)

               

               

              2010X1118

               

              200ml

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              D

              F 液(贈(zèng)品)

               

               

              F2013TBD

               

              200ml

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              E

              紅細(xì)胞裂解液(贈(zèng)品)

              NH4CL2009

               

              100ml

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              F

              說明書

               

               

               

               

               

              1

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

               

               

               

               

               

               

               

              A 適用儀器

               

               

               

               

               

               

               

               

              zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

               

               

               

               

               

              B 耗材

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              產(chǎn)品名稱

               

              產(chǎn)品貨號(hào)

               

              產(chǎn)地

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              15ml 離心管散裝

               

              339650

               

              美國 NUNC

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              15ml 離心管架裝

               

              339651

               

              美國 NUNC

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              50ml 離心管散裝

               

              339652

               

              美國 NUNC

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              50ml 離心管架裝

               

              339653

               

              美國 NUNC

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              無菌膠頭滴管或塑料滴管

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

               

              【檢驗(yàn)方法】

               

               

               

               

               

               

               

               

              全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

               

              • 首先制備組織單細(xì)胞懸液,制備方法詳見組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)

               

              • 取一支 15ml 離心管,加入與制備的組織單細(xì)胞懸液等量的分離液(注:分離液zui少不得少于 5ml)。

               

               

              • 用吸管小心吸取制備的組織單細(xì)胞懸液加于分離液液面上,400-500g,離心 20-30min。(注:根據(jù)組織單細(xì)胞懸液樣本量確定離心條件,組織單細(xì)胞懸液量越大,離心力越大,離心時(shí)間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到*分離效果)。

               

              • 離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細(xì)胞層(一層或兩層),加入 10 ml 清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118),混勻細(xì)胞。250g,離心 10min。重復(fù)洗滌 2-3 次,即得所需白細(xì)胞。

               

              • 如有紅細(xì)胞殘留請(qǐng)使用紅細(xì)胞裂解液(產(chǎn)品編號(hào):NH4CL2009)裂解紅細(xì)胞,具體操作方法詳見紅細(xì)胞裂解液使用說明

               

              【注意事項(xiàng)】

               

              • 全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得*的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),樣品存放時(shí)間越長,細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

               

              • 本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。

               

              • 分離液用量大于制備的組織單細(xì)胞懸液樣本時(shí),分離效果更佳。

               

              • 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低,請(qǐng)上海研謹(jǐn)技術(shù)以尋求幫助

               

              【儲(chǔ)存條件及有效期】

               

              18-25℃保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟

               

              封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

               

              【參考值(參考范圍)】

               

              本實(shí)驗(yàn)白細(xì)胞提取率及純度大于 80%

               

              下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

               

               

              紅細(xì)胞

               

              白細(xì)胞

               

              血小板

               

               

               

               

               

               

               

               

              4.0-10.0×109

               

              含量(個(gè)/L

              4.0-5.5×1012

              中性粒細(xì)胞

              淋巴細(xì)胞

              單核細(xì)胞

              1.0-3.0×1011

               

               

              50%-70%

              20%-40%

              3%-8%

               

               

               

               

               

               

               

               

              【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

               

              1. 組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)

               

               

              • 所獲得白細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

               

              • 所獲得白細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

               

              • 所獲得白細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)
              • B.免疫組化技術(shù)
              • C.原位雜交技術(shù)

               

              D.PCR 技術(shù)

               

              注:上述技術(shù)方案詳情請(qǐng)登陸本公司搜索細(xì)胞分離、

               

              純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊(cè),并在說明書項(xiàng)目欄下下載使用。

               

              【可能存在的問題及解決方法】

               

              1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:

               

              出現(xiàn)情況

              出現(xiàn)原因

              建議解決方案

               

               

               

              離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層

              轉(zhuǎn)速過小或離心時(shí)間過短

              適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

               

               

              離心后目的細(xì)胞存在于分離液中

              轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長

               

               

               

               

              離心后白環(huán)層彌散

              細(xì)胞密度過大

              調(diào)整細(xì)胞密度

               

               

              離心后白環(huán)層太淺或看不見

              細(xì)胞密度過小

               

               

               

               

               

              • 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離心時(shí)間,對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

               

              • 本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級(jí)原料,性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可

               

              能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

               

              注:在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到*分離效果,

               

              離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。

              滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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